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利用荧光显微镜高通量测定微生物出生及死亡速度

日期:2019-06-11 人气:875

    为了能够自动测定荧光酵母的生长及死亡速度,作者首先对荧光显微镜进行了设置(如图1),即对常规的荧光显微镜补加一些附件。恒温罩(Enclosure)保持细胞样品温度,自动移动的平台(Motorized stage)可以重复对很多样品用明场和荧光进行拍照,自动转换的滤片(Motorized filter cubes)可以自动进行滤片切换,ITO Lid warmer(热盖玻璃)则避免了拍照过程中水蒸气在盖子上的凝结。此外,作者还专门写了一个“LabVIEW”程序,该程序可以自动在明场对焦,然后转到荧光下对酵母进行拍照,从而减少光毒性对生长的影响。

    通过上述荧光显微镜的设置,作者对lys2-和ade8-这两种酵母的生长及死亡速率进行了测定,并比较了不同测定方法的结果。lys2-和ade8-是两种分别需要Lys(赖氨酸)和Ade(腺嘌呤)才能成长
突变体。结果表明,lys2-和ade8-分别在缺乏Lys和Ade的培养基中生长时,其死亡速度均呈现出时间依赖性;并且它们的死亡速度分别与Lys和Ade的浓度有关(如图2)。此外,荧光显微镜自动检测法与手动检测法及流式细胞仪检测法相比,其结果与后两种的检测结果基本一致。

    另外,作者发现极低浓度的营养可能不会被消耗,并且低浓度营养物会导致不同菌株以不同的速度死亡和出生(如图3)。其原因可能是菌株没有在低浓度营养物培养的条件下进化过,因此不同基因型产生不同的生长速度。

     此外,在描述lys2-和ade8-的细胞生长速度时,作者发现Moser(S-型)模型要优于Monod模型。

    最后,作者希望通过这种高通量荧光显微镜定量测定法,能为今后荧光生长的测定提供一种简单,快速,准确的方法。

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